判斷陰性對照是否污染，關(guān)鍵看它是否“干凈"——如果它長了菌或出現(xiàn)陽性信號，就說明實(shí)驗(yàn)環(huán)境或操作有問題了。具體可以這樣排查：
一、先看結(jié)果
?無菌檢驗(yàn)?：陰性對照應(yīng)該無菌生長，一旦有菌落出現(xiàn)，立刻排查污染。
?PCR檢測?：陰性對照不該有DNA譜帶，有帶就說明體系被污染了。
二、排查污染源
?操作污染?：
檢查手套、吸頭是否混用，操作時是否規(guī)范。
用稀酸擦拭臺面，更換污染手套。
?試劑污染?：
試劑分裝保存，避免反復(fù)凍融。
用無菌水做空白對照，若長菌說明試劑有問題。
?環(huán)境問題?：
實(shí)驗(yàn)臺、通風(fēng)系統(tǒng)是否定期消毒。
操作區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)是否嚴(yán)格隔離。
三、優(yōu)化操作
?分區(qū)操作?：標(biāo)本處理、擴(kuò)增、產(chǎn)物分析區(qū)分開。
?工具專用?：移液器、吸頭等不混用。
?嚴(yán)格消毒?：實(shí)驗(yàn)臺、設(shè)備表面用含氯消毒液擦拭。
四、驗(yàn)證結(jié)果
?陽性對照?：用已知陽性樣本驗(yàn)證檢測能力。
?陰性對照?：用無菌水或空白基質(zhì)做對照。
?同步培養(yǎng)?：和樣品同溫同時間培養(yǎng)，全程無菌落才算合格。
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