研生試劑-病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)詳解
摘要：病原生物學(xué)是研究病原生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)規(guī)律以及與機(jī)體相互作用關(guān)系的一門(mén)學(xué)科，主要包括醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和人體寄生蟲(chóng)學(xué)。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)主要研究病原微生物與人類(lèi)疾病的關(guān)系問(wèn)題，包括研究病原微生物的生命特征或生物學(xué)特性，致病性與致病機(jī)理、感染與免疫、特異性診斷和防治等問(wèn)題； 人體寄生蟲(chóng)學(xué)是研究人體寄生蟲(chóng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活史、致病機(jī)制、實(shí)驗(yàn)診斷、流行規(guī)律與防治措施的一門(mén)科學(xué)；免疫學(xué)是研究機(jī)體免疫系統(tǒng)的組成、結(jié)構(gòu)與功能、免疫應(yīng)答的發(fā)生機(jī)制以及免疫學(xué)在疾病診斷與防治中應(yīng)用的一門(mén)科學(xué)。
一. 實(shí)驗(yàn)要求
1. 實(shí)驗(yàn)前必須掌握與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)寄生蟲(chóng)學(xué)及醫(yī)學(xué)免疫學(xué)基礎(chǔ)理論。做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。
2. 對(duì)于設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，在老師的指導(dǎo)下，注意發(fā)揮自身潛能，勤于思考，靈活掌握所學(xué)知識(shí)。
3. 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中做到三嚴(yán)：嚴(yán)肅、嚴(yán)格、嚴(yán)謹(jǐn)。如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，按規(guī)定完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。對(duì)于失敗實(shí)驗(yàn)結(jié)果要分析原因，必要時(shí)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4. 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。
二. 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則
1.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室穿工作服，離開(kāi)時(shí)脫下，反折。
2.除必需教材、文具外，其他物品禁止帶入實(shí)驗(yàn)室。
3.按規(guī)定位置就坐。保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得隨意走動(dòng)、進(jìn)出。
4.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、吸煙。謹(jǐn)防經(jīng)口感染病原。
5.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和教師的要求進(jìn)行。
6.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若不慎將傳染性標(biāo)本污染桌面、手及其他物品時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師緊急處理，不得擅自處理。常見(jiàn)處理如下：
（1）皮膚破傷：先除盡異物，用無(wú)菌生理鹽水洗凈后，涂以2%紅汞或2%碘酒，必要時(shí)進(jìn)行包扎。
（2）灼傷：涂以凡士林油，5%鞣酸或2%苦味酸。
（3）化學(xué)藥品腐蝕傷：若為強(qiáng)酸，先用大量清水沖洗，再以5%碳酸氫鈉或氫氧化銨溶液洗滌中和之；強(qiáng)堿腐蝕傷，則先以大量清水沖洗后，再用5%醋酸或5%硼酸溶液洗滌中和之。若受傷部位是眼部，經(jīng)過(guò)上述步驟處理后，zui后滴入橄欖油或液體石
臘1、2 滴，滋潤(rùn)之。
（4）吸入病菌菌液：應(yīng)立即吐入盛有消毒液的容器內(nèi)消毒，并用1：1000高錳酸鉀漱口；根據(jù)菌類(lèi)不同，必要時(shí)需服藥預(yù)防。
（5）細(xì)菌污染衣物：應(yīng)立即脫下，放入3%來(lái)蘇爾或3%氯胺液內(nèi)浸泡半小時(shí)，或仔細(xì)包好經(jīng)高壓蒸汽消毒后清洗。
（6）菌液污染桌面：傾倒適量2-3%來(lái)蘇爾或0.5% 84 消毒液于污染處，浸泡半小時(shí)后抹去。若手上沾有活菌，應(yīng)浸泡于上述消毒液10-20 分鐘后，再以肥皂水沖刷之。
7.看示教時(shí)，未經(jīng)允許，不得移動(dòng)顯微鏡推進(jìn)尺。
8.愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)室器材及設(shè)備，認(rèn)真填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)設(shè)備使用紀(jì)錄。不慎發(fā)生損壞時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，照章賠償。
9.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，凡使用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材必須放在地點(diǎn)，如吸過(guò)菌液的吸管，毛細(xì)吸管要投入含有2-3%來(lái)蘇爾或0.1%新潔爾滅的玻璃筒中，或置“待消毒”處，不得放在桌上，亦不可沖洗于水槽內(nèi)。用過(guò)的波片也應(yīng)放于含有消毒液的容器內(nèi)。需要培養(yǎng)的實(shí)
驗(yàn)材料集中后放入溫箱中培養(yǎng)。
10.實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)室（包括桌面，地面，試驗(yàn)用具等），值日生打掃室內(nèi)衛(wèi)生，管好門(mén)窗、水電。離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前，將雙手在消毒液內(nèi)浸泡3-5分鐘，再用清水洗凈，方可離室。
三. 顯微鏡的使用
（一）普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)
光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)包括光學(xué)和機(jī)械兩個(gè)部分。光學(xué)部分主要有目鏡、物鏡、鏡筒、內(nèi)置光源（或反光鏡）、光闌等；機(jī)械部分包括鏡座、鏡臂、調(diào)節(jié)螺栓、載物臺(tái)、夾持器、
轉(zhuǎn)換器、粗調(diào)焦手輪及細(xì)調(diào)焦手輪等。（見(jiàn)圖1-1）
圖1 光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)示意圖
（二）顯微鏡（油鏡的使用）
顯微鏡的物鏡一般有低倍鏡、高倍鏡及油鏡。病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中zui常用者為油鏡。
1.油鏡的原理 使用油鏡時(shí)需在玻片上滴加香柏油。由于從標(biāo)本玻片上透過(guò)的光線(xiàn)，因介質(zhì)密度不同，部分光線(xiàn)發(fā)生折射散失，使射入物鏡光線(xiàn)減少（高倍鏡孔徑較大，影響不顯著），因油鏡的孔徑較小，進(jìn)入的光線(xiàn)則不夠，致使物象顯現(xiàn)不清。當(dāng)在油鏡與標(biāo)本片之間加香柏油后，香柏油折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）,因此可增加進(jìn)入透鏡的光線(xiàn)，使視野亮度加強(qiáng)。
2. 在油鏡頭上常有下列幾種標(biāo)記：①放大倍數(shù)是90×或100/；若鏡筒的長(zhǎng)度不變，顯微鏡的放大倍數(shù)=目鏡倍數(shù)乘以物鏡的倍數(shù)。②鏡頭下緣有一白色線(xiàn)圈或黑色線(xiàn)圈；③刻有
“油”或外文“HI”、“Oel”、“Oil”等字樣。④油鏡頭的長(zhǎng)度大于低倍鏡和高倍鏡。
3. 使用方法
① 對(duì)光 轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡鏡頭（4 倍、10 倍）轉(zhuǎn)至載物臺(tái)中央透光孔位置，打開(kāi)透光光闌，對(duì)光，直至目鏡中出現(xiàn)光線(xiàn)zui明亮、zui均勻的視場(chǎng)為止。顯微鏡的光源可分為內(nèi)置光源和外置照明。內(nèi)置光源：接通電源，按下底座的開(kāi)關(guān)，電源打開(kāi)即可。外置光源：將光圈放到zui大位置，在用眼睛觀察目鏡的同時(shí)，轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡使其朝向光源（自然光或燈光），使視野中的光線(xiàn)zui明、均勻。如靠近光源，可用平面反光鏡，如距光源較遠(yuǎn)，可用凹面反光鏡。根據(jù)所觀察的標(biāo)本，升降集光器和縮放光圈，以獲*光度。一般染色標(biāo)本用油鏡檢查時(shí)，光度宜強(qiáng)，可將光圈開(kāi)足，集光器上升至與載物臺(tái)相平；檢查未染色標(biāo)本用低倍鏡或高
倍鏡觀察時(shí)，應(yīng)適當(dāng)縮小光圈，下降集光器，使光度減弱。
② 裝片 將標(biāo)本片放置在工作臺(tái)的夾持器中，用夾持起移動(dòng)標(biāo)本片至工作臺(tái)開(kāi)口中心（透光孔處）。
③ 調(diào)節(jié)焦距 通過(guò)旋轉(zhuǎn)粗調(diào)焦手輪，將載物臺(tái)升到zui高限定位置（制片不能觸到物鏡），此時(shí)已準(zhǔn)備好調(diào)焦。使用4 倍或10 倍物鏡，在目視目鏡的同時(shí)，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)手輪，使工作臺(tái)緩慢下降，在目視目鏡中觀察到的清晰的圖像時(shí)，再調(diào)節(jié)光闌聚光鏡孔，選擇與物鏡相匹配的孔，調(diào)節(jié)微調(diào)焦手輪，使視野中的圖像zui清晰。用低倍鏡找出標(biāo)本的范圍，然后提高鏡筒，在標(biāo)本的待檢部位加一小滴香柏油，慢慢將油鏡頭浸于油中，但勿接觸玻片。然后，自目鏡處一面觀察，一面微轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡筒徐徐上升，待看到模糊物象時(shí)，改用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至物象清晰。如果是滴片標(biāo)本，先滴一滴標(biāo)本在玻片上，輕輕蓋上蓋玻片。加蓋玻片時(shí)，先將蓋玻片的一邊與在玻片上的水滴邊緣接觸，然后自一側(cè)輕輕放下，先在低倍鏡下觀察，然后在高倍鏡下觀察，通過(guò)改變光圈的大小或轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦手輪。
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